Повноспектральна або «спектральна» проточна цитометрія — це відносно нещодавно розроблена технологія, яка дозволяє проводити високорозмірний проточний цитометричний аналіз клітин та частинок в суспензії. Ця технологія набула популярності, оскільки вона допомагає швидко виявляти велику кількість антигенів одночасно у форматі аналізу в одній пробірці.
У спектральних проточних цитометрах практично все випромінюване світло від кожного флуорофора фіксується серією з багатьох детекторів, для кожного лазера. Таким чином, кожен флуорофор вимірюється за допомогою декількох десятків детекторів одночасно. Це дозволяє спектральному проточному цитометру створити унікальний «спектральний підпис» для кожного випромінюваного флуорофора.
Хоча спектральна проточна цитометрія — це сучасна технологія, проте вона вже широко використовується у медицині. В 2020 році Cytek отримав сертифікат CE-IVD для використання своїх спектральних проточних цитометрів та реагентів в медицині. Компанія вже має 5 офісів в США (зі штаб-квартирою в м. Фремонт, Каліфорнія), КНР, Японії та Нідерландах. Перелік встановлених приладів налічує вже понад 2200 цитометрів по всьому світу. Найбільш удосконалений цитометр Cytek Aurora містить 5 лазерів (5L 16V-14B-10YG-8R-UV16), три канали розсіювання та 64 канали флуоресценції.
.jpg)
Технологія повного спектру від Cytek дає можливість проводити незмішування в режимі реального часу (real-time unmixing) в програмному забезпеченні SpectroFlo. Це забезпечує більший вибір флуорохромів та гнучкість панелей, а також дозволяє користувачам швидко відображати результати та статистику експериментів. Все це створює ідеальне рішення для проточної цитометрії для глибокого імунопрофілювання від 24 до 40 кольорів.
Однією із таких панелей є 25-колірна панель, що розроблена та оптимізована вченими Cytek аби забезпечити готове рішення для ідентифікації основних імунних субпопуляцій людини, які відіграють важливу роль у вродженій та адаптивній імунній відповіді при різних захворюваннях.
Дана панель дозволяє ідентифікувати Т-хелпери, Т-цитотоксичні клітини, В-клітини, NK-клітини, NKT-клітини, базофіли, дендритні клітини, ILC і моноцити в мононуклеарних клітинах периферичної крові людини і в цільній крові. Реагенти в цьому наборі допомагають розрізняти різні підмножини Т, В, NK, NKT, ДК-клітин, включаючи регуляторні Т-клітини, наївні Т-клітини, активовані Т-клітини, Т-клітини пам'яті, ефекторні Т-клітини, наївні В-клітини, В-клітини пам'яті, ранні NK, зрілі NK, термінальні NK, некласичні та класичні моноцити.
ПАНЕЛЬ CYTEK ДЛЯ 25-КОЛЬОРОВОГО ІМУНОПРОФІЛЮЮЧОГО АНАЛІЗУ
.jpg)
ПРИКЛАДИ ДАННИХ
Далі розглянемо приклад гейтування клітин для ідентифікації популяції з використанням набору Cytek 25-кольорового імунопрофільного аналізу. Спочатку клітини розділяють на синглети, життєздатні клітини, CD45+ і лімфоцити або моноцити на основі розсіювання. Лімфоцити поділяються на Т-лімфоцити, не-Т-лімфоцити, В-лімфоцити та ILC. Моноцити поділяються на фенотипи за експресією CD14 і CD16. Базофіли класифікуються в життєздатних клітинах.
.jpg)
У популяції Т-лімфоцитів можна кількісно визначити CD4+, CD8+ і CD4-CD8- Т-лімфоцити і далі розділити на наївні, з пам'яттю, ефекторні і термінальні ефекторні субпопуляції.
Крім того, ідентифікація та характеристика дендритних клітин, NK-клітин, γδ Т-клітин, NKT-подібних клітин та Т- регуляторних клітин можлива за допомогою 25-колірного набору для імунопрофілюючого аналізу Cytek.
ПОПУЛЯЦІЙНА ІЄРАРХІЯ КОЛЬОРОВОЇ ПАНЕЛІ (як приклад)
Отже, дана панель Cytek з 25-барвників є унікальним рішенням для глибокого імунопрофілювання пацієнтів.
Зростаюча потреба в цитометричних дослідженнях (особливо в галузі імунології та імуноонкології) та застосування спектральної проточної цитометрії, сприяють розвитку кольорових панелей та збільшенню кількості барвників в одній пробірці. Адже з практичної точки зору набагато легше та швидше запровадити 25-кольоровий експеримент для імунного профілюваня за допомогою Cytek, ніж виконувати дослідження в багатьох пробірках.
Таку кількість барвників із однієї пробірки можна досліджувати лише за допомогою програмного забезпечення SpectroFlo, перевагами якого є:
• можливість користувачу проводити спектральне незмішування (Unmix) та компенсацію;
• проведений експеримент можна зберегти як шаблон або створити для одноразового використання;
• референтні контролі можна записати та зберегти до бібліотеки приладу та використовувати повторно.
Всі ці фактори дають можливість користувачу зекономити час та ресурси на подальші експерименти, а розвиток та збільшення панелей реагентів тільки сприятимуть збільшенню показників при дослідженнях.
СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ
1. Brestoff J. R. Full spectrum flow cytometry in the clinical laboratory. Int J. Lab. Hematol. 2023; 45(S2): 44-49. doi: 10.1111/ijlh.14098.
2. Jensen HA, Wnek R. Analytical performance of a 25-marker spectral cytometry immune monitoring assay in peripheral blood. Cytometry. 2021; 99: 180–193. https://doi.org/10.1002/cyto.a.24290.
3. https://cytekbio.com