Всесвітній день боротьби з туберкульозом. ПЛР-діагностика Mycobacterium tuberculosis від GeneProof

Посилання на джерело https://wise-mag.com/index.php/2025/06/30/tuberculosis-how-do-we-get-it/

 

Щороку 24 березня відзначають Всесвітній день боротьби з туберкульозом. Ця дата обрана не випадково, адже в цей день у 1882 році Роберт Кох оголосив про виявлення бактерії, що спричиняє захворювання. Відтоді було відкрито шлях до діагностики та лікування від туберкульозу.

 

Туберкульоз залишається одним із найбільш смертоносних інфекційних вбивць у світі. За оцінками, чверть світового населення заражена туберкульозними паличками, більшість з цих людей не є хворими або заразними, але вони мають ризик розвитку захворювання у майбутньому. Це залежить, передусім, від кількох факторів, найважливішим з яких є імунологічний статус людини [8].

 

Туберкульоз залишається провідною причиною смертності від одного інфекційного збудника у світі. За даними Всесвітньої організації охорони здоров’я (ВООЗ), у 2022 році було зареєстровано приблизно 10,6 млн нових випадків захворювання та 1,6 млн смертей від захворювання (Всесвітня організація охорони здоров’я, 2023). Більшість випадків були зареєстровані в країнах з низьким та середнім рівнем доходу, на які припадало дві третини від загальної кількості випадків у світі [1].

 

Згідно статистичним даним Центру громадського здоров’я Міністерства охорони здоров’я України у жовтні 2025 року було зареєстровано 1281 людину з туберкульозом:

• 945 нових випадків захворювання (мається на увазі випадок туберкульозу в пацієнта, який ніколи раніше не проходив лікування від захворювання або приймав антимікобактеріальні препарати менше 1 місяця);
• 269 пацієнтів з рецидивом;
• 67 — інші (серед них: люди, які відновили лікування; пацієнти після невдалого курсу лікування; пацієнти з невідомою історією попереднього лікування).

 

268 людей із загальної кількості мали лікарсько-стійку форму туберкульозу. Серед 1225 нових епізодів (мається на увазі особа з новим випадком захворювання, рецидивом чи невідомою історією попереднього лікування) захворювання у 1132 людей із туберкульозом виявлено легеневу форму захворювання, а у 93  — позалегеневу; осіб чоловічої статі – 891, жіночої статі — 334. 211 пацієнтів мали ВІЛ-позитивний статус. У жовтні 2025 року вилікувалися від туберкульозу 894 людини. Інформація станом на 12.11.2025 [5].

 

Посилання на джерело https://phc.org.ua/news/statistika-tuberkulozu-v-ukraini-zhovten-2025-roku

 

Прямі та непрямі витрати, пов'язані із туберкульозом, а також соціальні наслідки часто є катастрофічними як для окремого пацієнта, так і для суспільства в цілому. Тому швидке та точне виявлення Mycobacterium tuberculosis має першочергове значення для призначення емпіричної антибіотикотерапії та для належного впровадження заходів у сфері охорони здоров’я, спрямованих на ефективне припинення передачі та запобігання поширенню захворювання. Насправді, необхідні інтенсивні зусилля для розробки нових медичних технологій для профілактики, діагностики та лікування туберкульозу [2].

 

Діагностика захворювання

 

До методів діагностики туберкульозної інфекції відносять традиційну шкірну туберкулінову пробу (пробу Манту), тест вивільнення гамма-інтерферону (ТВГІ) та нові шкірні тести, що за своєю специфічністю близькі до тестів ТВГІ, а способом застосування нагадують пробу Манту.

 

Проба Манту. Туберкулінова проба, відома як проба Манту, — традиційний, відомий усім і доступний метод виявлення туберкульозної інфекції. Однак він може давати хибно позитивний результат через попередню вакцинацію БЦЖ, а також у людей з ослабленим імунітетом або у випадках пізньої імунної відповіді.

 

Тест вивільнення гамма-інтерферону. Тест вивільнення гамма-інтерферону — сучасний лабораторний аналіз крові, який дозволяє з високою точністю визначити наявність туберкульозної інфекції в людини. Для аналізу використовується венозна кров пацієнта. Цей метод дослідження не дає хибнопозитивних реакцій, пов’язаних із попередньою вакцинацією БЦЖ в анамнезі або за наявності нетуберкульозної мікобактеріальної інфекції.

 

Нові шкірні тести — поєднання методик. Шкірні тести поєднують в собі простішу методику проби Манту зі специфічністю ТВГІ. На підставі наявних доказів ці тести допоможуть уникнути негативних наслідків хибнопозитивних результатів діагностики, оскільки їхня діагностична точність близька до тестів вивільнення гамма-інтерферонів та більша за пробу Манту. Перевагою цих тестів також є менша вартість у порівнянні з тестами ТВГІ [6].

 

Туберкульоз виліковний, якщо вчасно його діагностувати, пройти повний курс терапії та дотримуватися всіх рекомендацій медиків. На початку 2023 року в Україні оновили стандарти медичної допомоги при туберкульозі, щоб вони відповідали останнім рекомендаціям ВООЗ.

 

Пріоритетним та першочерговим методом діагностики є мікробіологічний тест, оскільки він дозволяє правильно встановити діагноз та якнайшвидше призначити ефективну схему лікування. Для його проведення пацієнт здає мокротиння.

 

Спочатку зазвичай застосовують автоматизований молекулярно-генетичний тест за допомогою напівкількісної гніздової ПЛР у режимі реального часу для діагностики in vitro, який дає змогу за декілька годин не лише підтвердити наявність цього захворювання, а й визначити чутливість до рифампіцину — препарату, який часто застосовують для лікування туберкульозу. За допомогою цього методу можна досліджувати не лише мокротиння, а й інші біологічні рідини, у тому числі кал у дітей, які ще не вміють відкашлювати мокротиння.

 

Для діагностики туберкульозу також застосовують такі обстеження, як рентгенографія або комп’ютерна томографія органів грудної клітки. Для розшифрування результатів рентгенографії в низці країн використовують так званий аналіз за допомогою комп’ютера (computer-aided detection). Власне, йдеться про штучний інтелект, який навчили аналізувати численні знімки грудної клітки та визначати туберкульоз специфічно і точно. До використання ШІ в аналізі рентгенограм долучилися і в Україні три перші області: Львівська, Сумська й Івано-Франківська.

 

Туберкульоз може вражати не лише легені, а й інші органи. При позалегеневих формах туберкульозу окрім цих методів можуть використовувати ультразвукове дослідження, бронхоскопію тощо.

 

Якщо не вдалось підтвердити туберкульоз за допомогою вищезазначених методів діагностики, застосовується біопсія з отриманням матеріалу та подальшого мікробіологічного та морфологічного дослідження [7].

 

Наразі загальновизнаним «золотим стандартом» серед лабораторних методів виявлення та ідентифікації Mycobacterium tuberculosis є поєднання мазка на кислотостійкі бацили (acid-fast bacillus – AFB) для первинного скринінгу, посіву для виділення, та ідентифікації бактерій. Мікроскопічне дослідження мазків на AFB може дати результат протягом 24 годин. На жаль, мазок не є специфічним для M. tuberculosis і не дуже чутливим, вимагаючи від 10³ до 10⁴ мікроорганізмів на мл мокротиння. Мікобактерії також можна виявити та ідентифікувати безпосередньо у зразках мокротиння шляхом аналізу міколової кислоти мікобактерій за допомогою високоефективної рідинної хроматографії. Однак чутливість цього методу є низькою, і пряме виявлення з мокротиння можливе лише у зразках із позитивним результатом мазка. Культуральне дослідження бактерій є кращим за мазок на AFB та аналіз міколової кислоти як за чутливістю, так і за специфічністю. Однак мікобактерії є вибагливими організмами з дуже суворими вимогами до умов росту. Як наслідок, діагностичні методи на основі культурального дослідження є повільними.

 

Необхідність проведення біохімічних досліджень для ідентифікації видів мікобактерій збільшує час, необхідний для встановлення діагнозу. Навіть при використанні нуклеїнових кислотних зондів для «швидкої» ідентифікації видів з культур результати часто стають доступними лише через 2–8 тижнів. Очевидно, що більш швидкий тест для виявлення туберкульозу легенів та інших нетуберкульозних мікобактеріальних інфекцій значно полегшив би лікування пацієнтів.

 

Метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) виявився дуже корисним інструментом у швидкій діагностиці інфекційних захворювань, а саме мікобактеріальних інфекцій. Багато ПЛР-аналізів мікобактерій використовують видоспецифічні праймери, що дозволяють виявляти один або обмежену кількість видів мікобактерій. Видоспецифічні ампліфікаційні тести корисні для виявлення та ідентифікації видів мікобактерій. Однак можна виявити лише обмежену кількість видів мікобактерій. Це обмежує корисність цих тестів, оскільки для виявлення інших видів потрібні додаткові ампліфікації. Існують й інші обмеження, пов’язані з цими тестами. Найпоширенішим з них є тест, спрямований на інсерційний елемент IS6110, який зустрічається лише у видах комплексу M. tuberculosis. Однак існують ізоляти M. tuberculosis, які не містять IS6110, хоча вони є рідкісними [3].

 

Серед комерційно доступних ПЛР-наборів, які використовують мультикопійну інсерційну послідовність IS6110 та послідовність гена імуногенного білка MPB64, вирізняють набір ПЛР для виявлення Mycobacterium tuberculosis від чеського виробника GeneProof для діагностики in vitro. До переваг даного набору відносять:

• подвійне виявлення мішеней:
• • подвійне виявлення мішеней запобігає помилкам у виявленні, спричиненим появою мутацій;
  • надійність забезпечується завдяки виявленню багатокопійних послідовностей IS6110 та MPB64.

 

• висока специфічність — виявлення всіх видів комплексу Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis, M. microti, M. canetti, M. pinnipedi, M. caprae, M. orygis, M. mungi та вакцинального штаму Bacillus Calmmette-Guérin, BCG);

 

• широкий діапазон валідованих клінічних матеріалів:
  
  • дозволяє проводити виявлення з широкого спектру респіраторних та шлунково-кишкових зразків;
  • мокрота, бронхоальвеолярний лаваж, мазок, сеча, спинномозкова рідина, плазма, кал.

 

• концепція простоти використання:
• • готова до використання суміш майстер-міксу в одній пробірці містить усі компоненти для ПЛР-ампліфікації;
    не потрібно піпетувати додаткові реагенти для ПЛР;
  • значно полегшує робочий процес у лабораторії.

 

• запобігання контамінації — майстер-мікс містить урацил-ДНК-глікозилазу (UNG) та dUTP, що запобігає перехресним контамінаціям [4].

 

Посилання на джерело — https://www.geneproof.com/geneprooftm-mycobacterium-tuberculosis-pcr-kit/p1077

 

ВИСНОВКИ

 

Отже, туберкульоз є основним інфекційним захворюванням у країнах, що розвиваються. Він залишається значною проблемою охорони здоров'я у світі, оскільки щороку реєструється значна кількість нових випадків, зокрема і в Україні.

 

Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) стає дедалі популярнішим інструментом для більш чутливої та швидкої діагностики багатьох інфекційних захворювань, зокрема туберкульозу. З роками завдяки розробці ПЛР у режимі реального часу (rtPCR) було досягнуто значного вдосконалення технологій ПЛР. Основними перевагами rtPCR є скорочення часу виконання аналізу; автоматизація процедури, що зменшує час ручної роботи; та зниження ризику перехресної контамінації [2].

 

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ

 

1. Parwati I., Chaidir L., Yunus M., Montain M., Budhiarko D., Selasih S., Ristandi R., Rachman R., Nurhayati R., Pambudi I and Budiyati A. (2024). Evaluation of a real-time PCR assay performance to detect Mycobacterium tuberculosis, rifampicin, and isoniazid resistance in sputum specimens: a multicenter study in two major cities of Indonesia. Front. Microbiol. 15:1372647. doi: 10.3389/fmicb.2024.1372647.
2. Rozales F., Machado ABMP, De Paris F., Zavascki A., Barth A. PCR to detect Mycobacterium tuberculosis in respiratory tract samples: evaluation of clinical data. Epidemiology and Infection. 2014;142(7):1517-1523. doi:10.1017/S0950268813002598.
3. Tevere V., Hewitt P., Dare A., Hocknell P., Keen A., Spadoro J., Young K. Detection of Mycobacterium tuberculosis by PCR amplification with pan-Mycobacterium primers and hybridization to an M. tuberculosis-specific probe. J. Clin. Microbiol. 1996; 34(4): 918-23. doi: 10.1128/jcm.34.4.918-923.1996. PMID: 8815108; PMCID: PMC228917.
4. Набір для ПЛР GeneProof Mycobacterium tuberculosis. 2026 GeneProof. — Режим доступу: https://www.geneproof.com/geneprooftm-mycobacterium-tuberculosis-pcr-kit/p1077.
5. Статистика туберкульозу в Україні: жовтень 2025 року. — Державна установа «Центр громадського здоров’я Міністерства охорони здоров’я України». — Режим доступу: https://phc.org.ua/news/statistika-tuberkulozu-v-ukraini-zhovten-2025-roku.
6. Сучасні методи діагностики ТБ-інфекції та туберкульозу. — Державна установа «Центр громадського здоров’я Міністерства охорони здоров’я України». — Режим доступу: https://phc.org.ua/news/suchasni-metodi-diagnostiki-tb-infekcii-ta-tuberkulozu.
7. Як діагностують туберкульоз в Україні. — Міністерство охорони здоров'я України. Офіційний сайт. — Режим доступу: https://moz.gov.ua/uk/jak-diagnostujut-tuberkuloz-v-ukraini.
8. Як не втратити час? Всесвітній день боротьби з туберкульозом. — Державна установа «Центр громадського здоров’я Міністерства охорони здоров’я України». — Режим доступу: https://phc.org.ua/news/yak-ne-vtratiti-chas-vsesvitniy-den-borotbi-z-tuberkulozom.