Полноспектральная или «спектральная» проточная цитометрия — это относительно недавно разработанная технология, которая позволяет проводить высокоразмерный проточный цитометрический анализ клеток и частиц в суспензии. Эта технология приобрела популярность, поскольку она помогает быстро обнаруживать большое количество антигенов одновременно в формате анализа в одной пробирке.
В спектральных проточных цитометрах практически весь излучаемый свет от каждого флуорофора фиксируется серией из многих детекторов, для каждого лазера. Таким образом, каждый флуорофор измеряется с помощью нескольких десятков детекторов одновременно. Это позволяет спектральному проточному цитометру создать уникальную «спектральную подпись» для каждого излучаемого флуорофора.
Хотя спектральная проточная цитометрия — это современная технология, однако она уже широко используется в медицине. В 2020 году Cytek получил сертификат CE-IVD для использования своих спектральных проточных цитометров и реагентов в медицине. Компания уже имеет 5 офисов в США (со штаб-квартирой в г. Фремонт, Калифорния), КНР, Японии и Нидерландах. Перечень установленных приборов насчитывает уже более 2200 цитометров по всему миру. Наиболее усовершенствованный цитометр Cytek Aurora содержит 5 лазеров (5L 16V-14B-10YG-8R-UV16), три канала рассеивания и 64 канала флуоресценции.
Технология полного спектра от Cytek дает возможность 
проводить несмешиване в режиме реального времени (real-time unmixing) в программном обеспечении SpectroFlo. Это обеспечивает больший выбор флуорохромов и гибкость панелей, а также позволяет пользователям быстро отображать результаты и статистику экспериментов. Все это создает идеальное решение для проточной цитометрии для глубокого иммунопрофилирования от 24 до 40 цветов.
Одной из таких панелей является 25-цветная панель, разработанная и оптимизированная учеными Cytek чтобы обеспечить готовое решение для идентификации основных иммунных субпопуляций человека, которые играют важную роль во врожденном и адаптивном иммунном ответе при различных заболеваниях.
Данная панель позволяет идентифицировать Т-хелперы, Т-цитотоксические клетки, В-клетки, NK-клетки, NKT-клетки, базофилы, дендритные клетки, ILC и моноциты в мононуклеарных клетках периферической крови человека и в цельной крови. Реагенты в этом наборе помогают различать различные подмножества Т, В, NK, NKT, ДК-клеток, включая регуляторные Т-клетки, наивные Т-клетки, активированные Т-клетки, Т-клетки памяти, эффекторные Т-клетки, наивные В-клетки, В-клетки памяти, ранние NK, зрелые NK, терминальные NK, неклассические и классические моноциты.
ПАНЕЛЬ CYTEK ДЛЯ 25-ЦВЕТНОГО ИММУНОПРОФИЛИРУЮЩЕГО АНАЛИЗА
ПРИМЕРЫ ДАННЫХ
Далее рассмотрим пример гейтирования клеток для идентификации популяции с использованием набора Cytek 25-цветного иммунопрофильного анализа. Сначала клетки разделяют на синглеты, жизнеспособные клетки, CD45+ и лимфоциты или моноциты на основе рассеивания. Лимфоциты делятся на Т-лимфоциты, не-Т-лимфоциты, В-лимфоциты и ILC. Моноциты делятся на фенотипы по экспрессии CD14 и CD16. Базофилы классифицируются в жизнеспособных клетках.
В популяции Т-лимфоцитов можно количественно определить CD4+, CD8+ и CD4-CD8- Т-лимфоциты и далее разделить на наивные, с памятью, эффекторные и терминальные эффекторные субпопуляции.
Кроме того, идентификация и характеристика дендритных клеток, NK-клеток, γδ Т-клеток, NKT-подобных клеток и Т-регуляторных клеток возможна с помощью 25-цветного набора для иммунопрофилирующего анализа Cytek.
ПОПУЛЯЦИОННАЯ ИЕРАРХИЯ ЦВЕТОВОЙ ПАНЕЛИ (в качестве примера)
Итак, данная панель Cytek из 25-красителей является уникальным решением для глубокого иммунопрофилирования пациентов.
Растущая потребность в цитометрических исследованиях (особенно в области иммунологии и иммуноонкологии) и применение спектральной проточной цитометрии, способствуют развитию цветных панелей и увеличению количества красителей в одной пробирке. Ведь с практической точки зрения гораздо легче и быстрее ввести 25-цветной эксперимент для иммунного профилирования с помощью Cytek, чем выполнять исследования во многих пробирках.
Такое количество красителей из одной пробирки можно исследовать только с помощью программного обеспечения SpectroFlo, преимуществами которого являются:
• возможность пользователю проводить спектральное несмешивание (Unmix) и компенсацию;
• проведенный эксперимент можно сохранить как шаблон или создать для одноразового использования;
• референтные контроли можно записать и сохранить в библиотеку прибора и использовать повторно.
Все эти факторы дают возможность пользователю сэкономить время и ресурсы на дальнейшие эксперименты, а развитие и увеличение панелей реагентов только способствовать увеличению показателей при исследованиях.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАНЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Брестофф Дж. Р. Полноспектральная проточная цитометрия в клинической лаборатории. Int J. Lab. Hematol. 2023; 45(S2): 44-49. doi: 10.1111/ijlh.14098.
2. Jensen HA, Wnek R. Аналитическая эффективность 25-маркерного спектрального цитометрического анализа иммунного мониторинга в периферической крови. Cytometry. 2021; 99: 180-193. https://doi.org/10.1002/cyto.a.24290.
3. https://cytekbio.com