Акантамебы — свободноживущие простейшие, обладающие убиквитарным распространением и населяющие различные экосистемы, такие как почва, вода, воздух. Они были изолированы из бассейнов, водопроводных систем, охладительных и стоматологических установок, аппаратов для гемодиализа, медицинских веществ (жидкость для линз) и т. д.
Среди свободноживущих амеб только четыре рода включают условно-патогенных для человека и животных представителей: Acanthamoeba, Balamuthia, Naegleria и Sappinia. Их таксономическое положение несколько раз пересматривали в соответствии с критериями современной систематики. Опираясь на классификацию, предложенную Международным обществом протозоологов, эти микроорганизмы были отнесены к так называемым «супергруппам». Acanthamoeba и Balamuthia были отнесены к супергруппе Amoebozoa: Acanthamoevidae; Naegleria fowleri к Excavata: Heterolobosia: Vahlkampfiidae; и Sappinia к Amoebozoa: Flabellinea: Thecamoevidae. Свободноживущие амебы способны вызывать такие заболевания у людей, как: амебный кератит, гранулематозный энцефалит, менингит и менингоэнцефалит, синуситы, кожные поражения и т. д. [2].
Люди часто контактируют с Acanthamoeba путем вдыхания цист, находящихся в воздухе. Организмы могут быть обнаружены в носоглотке, а циркулирующие IgG-антитела к антигенам Acanthamoeba представлены у 80% здоровых людей. Аналогично, в слезах здоровых людей также содержатся специфические IgA-антитела к антигенам Acanthamoeba.
Acanthamoeba устойчива ко многим видам дезинфекции и деконтаминации. Она существует в двух формах: активная трофозоитная форма, которая движется с помощью сокращений пальцевидных выступов, и неактивная циста, окруженная двухслойной целлюлозной оболочкой. Циста способна выдерживать условия окружающей среды, включая длительные периоды экстремальных температур, pH и высыхания. Переход в форму цисты может происходить в условиях ограниченного содержания питательных веществ, накопления продуктов метаболизма и токсинов в культуральной среде, а также в неблагоприятных условиях окружающей среды. Этот процесс дифференциации, вероятно, также играет важную роль в патогенезе акантоамебного кератита (Acanthamoeba keratitis).
Существуют также доказательства симбиотических отношений между Acanthamoeba и организмами, которые она поглощает. Патогенные организмы могут удерживаться в цитоплазме, обеспечивая защиту поглощенного организма от дезинфекции или защитных механизмов хозяина и позволяя ему расти и размножаться.
Акантамеба чаще всего вызывает кератит у человека, однако некоторые штаммы (отличные от тех, которые вызывают кератит) также могут очень редко инфицировать мозг (гранулематозный амебный энцефалит) у лиц с ослабленным иммунитетом, а также кожу. Род Acanthamoeba классифицирован на 18 различных подтипов, обозначенных T1-T18. Генотипирование все чаще используется для характеристики штаммов, вызывающих заболевания у человека. Изоляты роговицы, связанные как с контактными линзами, так и не связанные с ними, чаще всего ассоциируются с генотипом T4, который включает виды Acanthamoeba castellanii, A. polyphaga и A. culbertsonii.
Акантамебный кератит обычно протекает как одностороннее заболевание, но может возникать и двусторонне. Ранними симптомами заболевания обычно являются боль, светобоязнь и чувство слезотечения, иногда в большей степени, чем это следует из клинической картины. Однако акантамебный кератит может также развиваться без боли.
На ранних стадиях акантамебный кератит ограничивается эпителием с точечной кератопатией и часто псевдодендритами. На поздних стадиях заболевания состояние прогрессирует до стромы и характеризуется разрушением эпителия с рецидивирующим течением и воспалением стромы. Иммунные кольцевые язвы и склерит, которые считаются стерильными воспалительными реакциями, обычно возникают позже в 15–20% случаев. Если развивается склерит, часто сообщается об очень сильной, постоянной боли. На поздних стадиях заболевания также могут наблюдаться истончение стромы, помутнение роговицы, гипопион, перфорация роговицы, катаракта, глаукома и воспаление заднего сегмента. Лимбит наблюдается в 90% случаев как на ранних, так и на поздних стадиях заболевания, и часто наблюдается реакция передней камеры.
Диагностика
Культуральный посев роговицы. Золотым стандартом в диагностике акантамебного кератита по-прежнему остается культуральное исследование роговицы. Хотя конфокальная микроскопия продолжает быть полезным вспомогательным средством, особенно для выявления цисты на поздней стадии заболевания и для мониторинга терапии, диагностическая чувствительность и специфичность по-прежнему зависят от исследователя.
Гистология. Зачастую гистологическое исследование также проводят при установлении диагноза или на более поздних стадиях заболевания на основе образца биопсии роговицы. Если также отбирается образец для гистологии, его обычно устанавливают и фиксируют на стеклянной пластине для иммуногистохимии. Образец окрашивают для выявления организмов или их специфических антигенов для визуализации под световым или флуоресцентным микроскопом.
ПЦР. Полимеразная цепная реакция позволяет идентифицировать генотип микроорганизма на основе анализа последовательности рибосомной ДНК, присутствующей в образце ткани или биологической жидкости. Эта методика, использующая мазок или образец эпителия, чувствительна в 85 % случаев для Acanthamoeba и полезна в случаях с отрицательным результатом культурального исследования [1].
Диагностика инфекций Acanthamoeba с помощью микроскопического исследования клинических образцов является сложной и требует квалифицированного лабораторного персонала. Кроме того, может понадобиться длительная инкубация культур, особенно когда пациенты уже прошли лечение. Однако диагностика Acanthamoeba была упрощена и усовершенствована благодаря созданию нескольких ПЦР-тестов, нацеленных на различные участки гена ядерной малой субъединицы 18S рРНК (Rns) [3].
Именно поэтому для успешного и правильного лечения важна ранняя и быстрая диагностика. Новинкой от австрийской компании Ingenetix GmbH является набор реагентов ParoReal Kit Acanthamoeba T4 (CE-IVD), который позволяет получить результат менее чем за 2 часа после выделения образцов.
(Источник —https://ingenetix.com/en/product/human/Kit+Acanthamoeba+T4/)
Данный набор — это неавтоматизированный тест для качественного определения ДНК (ген 18S рРНК) видов Acanthamoeba генотипа T4 (A. castellani, A. lugdunensis, A. mauritaniensis, A. polyphaga, A. rhysodes, A. royreba) с помощью ПЦР в режиме реального времени. Как уже отмечалось, генотип T4 является самым распространенным (примерно 86%) генотипом Acanthamoeba, вызывающим кератит во всем мире. Подходящими образцами для исследования являются выделенные ДНК из клинических образцов человека, связанных с кератитом (мазки из глаза, биопсии роговицы, глазные пунктаты, соскобы роговицы), а также контактные линзы и раствор для контактных линз. Специфическая для зонда кривая амплификации в канале FAM указывает на амплификацию специфической для Acanthamoeba ДНК. Внутренний положительный контроль ДНК обнаруживается в канале Cy5 и служит контролем для выделения ДНК и возможного ингибирования ПЦР в режиме реального времени. Данный набор совместим со многими анализаторами для проведения ПЦР в режиме реального времени [5].
Выводы
Таким образом, глобальное увеличение заболеваемости подталкивает офтальмологов учитывать акантамебный кератит при появлении очень похожих симптомов. 80% случаев данного заболевания диагностируются ошибочно, 48% из них ошибочно лечат стероидами от вируса простого герпеса (Herpes simplex virus), что, как было доказано, ухудшает течение акантамебного кератита [4].
Поэтому быстрая и качественная ПЦР-диагностика будет способствовать правильным лекарственным назначениям и скорейшему выздоровлению пациента.
Список литературы
1. Carnt N, Stapleton F. Strategies for the prevention of contact lens-related Acanthamoeba keratitis: a review Ophthalmic Physiol Opt 2016; 36: 77–92. doi: 10.1111/opo.12271.
2. Chobotar, A. (2019). Акантамеби як резервуар патогенних бактерій та вірусів. Інфекційні хвороби. 66–74. doi.org/10.11603/1681-2727.2019.2.10328.
3. Lamien-Meda, A.; Köhsler, M.; Walochnik, J. Real-Time PCR for the Diagnosis of Acanthamoeba Genotype T4. Microorganisms 2022, 10, 1307. https://doi.org/10.3390/ microorganisms10071307.
4. Acanthamoeba Keratitis Eye Foundation. Інформація про Acanthamoeba keratitis: рідкісне, але серйозне ураження рогівки ока, викликане вільноживучою амебою. Доступно за посиланням: akeyefoundation.com/acanthamoebakeratitis/
5. Ingenetix / ParoReal Kit Acanthamoeba T4. Виробник і діагностичний набір для виявлення ДНК амеби (генотип T4) шляхом ПЛР/реального часу, використовується для підтвердження діагнозу Acanthamoeba keratitis. Доступно за посиланням: ingenetix.com/en/product/human/Kit+Acanthamoeba+T4/
