Всемирный день борьбы с туберкулезом. ПЦР-диагностика Mycobacterium tuberculosis от GeneProof

Ссылка на источник https://wise-mag.com/index.php/2025/06/30/tuberculosis-how-do-we-get-it/

 

Ежегодно 24 марта отмечается Всемирный день борьбы с туберкулезом. Эта дата выбрана не случайно, ведь в этот день в 1882 году Роберт Кох объявил об обнаружении бактерии, вызывающей заболевание. С тех пор был открыт путь к диагностике и лечению туберкулеза.

 

Туберкулез остается одним из самых смертоносных инфекционных убийц в мире. По оценкам, четверть мирового населения заражена туберкулезными палочками, большинство из этих людей не являются больными или заразными, но у них есть риск развития заболевания в будущем. Это зависит, прежде всего, от нескольких факторов, важнейшим из которых является иммунологический статус человека [8].

 

Туберкулез остается ведущей причиной смертности от одного инфекционного возбудителя в мире. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в 2022 году было зарегистрировано примерно 10,6 млн новых случаев заболевания и 1,6 млн смертей от этого заболевания (Всемирная организация здравоохранения, 2023). Большинство случаев было зарегистрировано в странах с низким и средним уровнем дохода, на которые приходилось две трети от общего числа случаев в мире [1].

 

Согласно статистическим данным Центра общественного здоровья Министерства здравоохранения Украины, в октябре 2025 года было зарегистрировано 1281 человек с туберкулезом:

• 945 новых случаев заболевания (имеется в виду случай туберкулеза у пациента, который никогда ранее не проходил лечение от заболевания или принимал противомикобактериальные препараты менее 1 месяца);
• 269 пациентов с рецидивом;
• 67 — прочие (среди них: люди, возобновившие лечение; пациенты после неудачного курса лечения; пациенты с неизвестной историей предыдущего лечения).

 

268 человек из общего числа имели лекарственно-устойчивую форму туберкулеза. Среди 1225 новых эпизодов (имеется в виду лицо с новым случаем заболевания, рецидивом или неизвестной историей предыдущего лечения) заболевания у 1132 человек с туберкулезом выявлена легочная форма заболевания, а у 93 — внелегочная; мужского пола — 891, женского пола — 334. 211 пациентов имели ВИЧ-положительный статус. В октябре 2025 года излечились от туберкулеза 894 человека. Информация по состоянию на 12.11.2025 [5].

 

Ссылка на источник https://phc.org.ua/news/statistika-tuberkulozu-v-ukraini-zhovten-2025-roku

 

Прямые и косвенные расходы, связанные с туберкулезом, а также социальные последствия часто являются катастрофическими как для отдельного пациента, так и для общества в целом. Поэтому быстрое и точное выявление Mycobacterium tuberculosis имеет первостепенное значение для назначения эмпирической антибиотикотерапии и для надлежащего внедрения мер в сфере здравоохранения, направленных на эффективное пресечение передачи и предотвращение распространения заболевания. На самом деле, необходимы интенсивные усилия для разработки новых медицинских технологий для профилактики, диагностики и лечения туберкулеза [2].

 

Диагностика заболевания

 

К методам диагностики туберкулезной инфекции относятся традиционная кожная туберкулиновая проба (проба Манту), тест высвобождения гамма-интерферона (ТВИГ) и новые кожные тесты, которые по своей специфичности близки к тестам ТВИГ, а по способу применения напоминают пробу Манту.

 

Проба Манту. Туберкулиновая проба, известная как проба Манту, — традиционный, известный всем и доступный метод выявления туберкулезной инфекции. Однако он может давать ложноположительный результат из-за предшествующей вакцинации БЦЖ, а также у людей с ослабленным иммунитетом или в случаях позднего иммунного ответа.

 

Тест высвобождения гамма-интерферона. Тест высвобождения гамма-интерферона — современный лабораторный анализ крови, который позволяет с высокой точностью определить наличие туберкулезной инфекции у человека. Для анализа используется венозная кровь пациента. Этот метод исследования не дает ложноположительных реакций, связанных с предшествующей вакцинацией БЦЖ в анамнезе или при наличии нетуберкулезной микобактериальной инфекции.

 

Новые кожные тесты — сочетание методик. Кожные тесты сочетают в себе более простую методику пробы Манту со специфичностью ТВГИ. На основании имеющихся данных эти тесты помогут избежать негативных последствий ложноположительных результатов диагностики, поскольку их диагностическая точность близка к тестам высвобождения гамма-интерферонов и выше, чем у пробы Манту. Преимуществом этих тестов также является меньшая стоимость по сравнению с тестами ТВГИ [6].

 

Туберкулез излечим, если вовремя его диагностировать, пройти полный курс терапии и соблюдать все рекомендации врачей. В начале 2023 года в Украине обновили стандарты медицинской помощи при туберкулезе, чтобы они соответствовали последним рекомендациям ВОЗ.

 

Приоритетным и первоочередным методом диагностики является микробиологический тест, поскольку он позволяет правильно установить диагноз и как можно быстрее назначить эффективную схему лечения. Для его проведения пациент сдает мокроту.

 

Сначала обычно применяют автоматизированный молекулярно-генетический тест с помощью полуколичественной гнездной ПЦР в режиме реального времени для диагностики in vitro, который позволяет за несколько часов не только подтвердить наличие этого заболевания, но и определить чувствительность к рифампицину — препарату, который часто применяют для лечения туберкулеза. С помощью этого метода можно исследовать не только мокроту, но и другие биологические жидкости, в том числе кал у детей, которые еще не умеют откашливать мокроту.

 

Для диагностики туберкулеза также применяют такие обследования, как рентгенография или компьютерная томография органов грудной клетки. Для расшифровки результатов рентгенографии в ряде стран используют так называемый компьютерный анализ (computer-aided detection). По сути, речь идет об искусственном интеллекте, который научили анализировать многочисленные снимки грудной клетки и определять туберкулез специфично и точно. К использованию ИИ в анализе рентгенограмм присоединились и в Украине три первые области: Львовская, Сумская и Ивано-Франковская.

 

Туберкулез может поражать не только легкие, но и другие органы. При внелегочных формах туберкулеза помимо этих методов могут использовать ультразвуковое исследование, бронхоскопию и т. д.

 

Если не удалось подтвердить туберкулез с помощью вышеупомянутых методов диагностики, применяется биопсия с получением материала и последующим микробиологическим и морфологическим исследованием [7].

 

В настоящее время общепризнанным «золотым стандартом» среди лабораторных методов выявления и идентификации Mycobacterium tuberculosis является сочетание мазка на кислотоустойчивые бациллы (acid-fast bacillus – AFB) для первичного скрининга, посева для выделения и идентификации бактерий. Микроскопическое исследование мазков на AFB может дать результат в течение 24 часов. К сожалению, мазок не является специфичным для M. tuberculosis и не очень чувствительным, требуя от 10³ до 10⁴ микроорганизмов на мл мокроты. Микобактерии также можно обнаружить и идентифицировать непосредственно в образцах мокроты путем анализа миколевой кислоты микобактерий с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Однако чувствительность этого метода низкая, и прямое обнаружение в мокроте возможно только в образцах с положительным результатом мазка. Культуральное исследование бактерий превосходит мазок на AFB и анализ миколовой кислоты как по чувствительности, так и по специфичности. Однако микобактерии являются прихотливыми организмами с очень строгими требованиями к условиям роста. Как следствие, диагностические методы на основе культурального исследования являются медленными.

 

Необходимость проведения биохимических исследований для идентификации видов микобактерий увеличивает время, необходимое для установления диагноза. Даже при использовании нуклеиновых кислотных зондов для «быстрой& » идентификации видов из культур результаты часто становятся доступными лишь через 2–8 недель. Очевидно, что более быстрый тест для выявления туберкулеза легких и других нетуберкулезных микобактериальных инфекций значительно облегчил бы лечение пациентов.

 

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) оказался очень полезным инструментом в быстрой диагностике инфекционных заболеваний, а именно микобактериальных инфекций. Во многих ПЦР-анализах микобактерий используются видоспецифические праймеры, позволяющие выявлять один или ограниченное количество видов микобактерий. Видоспецифические амплификационные тесты полезны для выявления и идентификации видов микобактерий. Однако можно выявить лишь ограниченное количество видов микобактерий. Это ограничивает полезность этих тестов, поскольку для выявления других видов требуются дополнительные амплификации. Существуют и другие ограничения, связанные с этими тестами. Наиболее распространенным из них является тест, направленный на инсерционный элемент IS6110, который встречается только у видов комплекса M. tuberculosis. Однако существуют изоляты M. tuberculosis, которые не содержат IS6110, хотя они встречаются редко [3].

 

Среди коммерчески доступных ПЦР-наборов, использующих мультикопийную инсерционную последовательность IS6110 и последовательность гена иммуногенного белка MPB64, выделяют ПЦР-набор для выявления Mycobacterium tuberculosis от чешского производителя GeneProof для диагностики in vitro. К преимуществам данного набора относят:

 

• двойное обнаружение мишеней:
  • двойное обнаружение мишеней предотвращает ошибки в обнаружении, вызванные появлением мутаций;
  • надежность обеспечивается благодаря обнаружению многокопийных последовательностей IS6110 и MPB64.

 

• высокая специфичность — обнаружение всех видов комплекса Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis, M. microti, M. canetti, M. pinnipedi, M. caprae, M. orygis, M. mungiи вакцинного штамма Bacillus Calmmette-Guérin, BCG);

 

• широкий диапазон валидированных клинических материалов:
  
  • позволяет проводить диагностику широкого спектра респираторных и желудочно-кишечных образцов;
  • мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, мазок, моча, спинномозговая жидкость, плазма, кал.

 

• концепция простоты использования:
  
  • готовая к использованию смесь мастер-микса в одной пробирке содержит все компоненты для ПЦР-амплификации;
  • не требуется пипетировать дополнительные реагенты для ПЦР;
  • значительно облегчает рабочий процесс в лаборатории.

 

• предотвращение контаминации — мастер-микс содержит урацил-ДНК-гликозилазу (UNG) и dUTP, что предотвращает перекрестные контаминации [4].

 

Ссылка на источник — https://www.geneproof.com/geneprooftm-mycobacterium-tuberculosis-pcr-kit/p1077

 

ВЫВОДЫ

 

Итак, туберкулез является основным инфекционным заболеванием в развивающихся странах. Он остается серьезной проблемой здравоохранения во всем мире, поскольку ежегодно регистрируется значительное количество новых случаев, в том числе и в Украине.

 

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) становится все более популярным инструментом для более чувствительной и быстрой диагностики многих инфекционных заболеваний, в частности туберкулеза. С годами благодаря разработке ПЦР в режиме реального времени (rtPCR) было достигнуто значительное усовершенствование технологий ПЦР. Основными преимуществами rtPCR являются сокращение времени выполнения анализа; автоматизация процедуры, что уменьшает время ручной работы; и снижение риска перекрестной контаминации [2].

 

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

 

1. Parwati I., Chaidir L., Yunus M., Montain M., Budhiarko D., Selasih S., Ristandi R., Rachman R., Nurhayati R., Pambudi I и Budiyati A. (2024). Оценка эффективности ПЦР-анализа в реальном времени для выявления Mycobacterium tuberculosis, резистентности к рифампицину и изониазиду в образцах мокроты: многоцентровое исследование в двух крупных городах Индонезии. Front. Microbiol. 15:1372647. doi: 10.3389/fmicb.2024.1372647.
2. Rozales F., Machado ABMP, De Paris F., Zavascki A., Barth A. ПЦР для выявления Mycobacterium tuberculosis в образцах дыхательных путей: оценка клинических данных. Epidemiology and Infection. 2014;142(7):1517-1523. doi:10.1017/S0950268813002598.
3. Tevere V., Hewitt P., Dare A., Hocknell P., Keen A., Spadoro J., Young K. Обнаружение Mycobacterium tuberculosis путем ПЦР-амплификации с использованием праймеров, специфичных для рода Mycobacterium, и гибридизации с зондом, специфичным для M. tuberculosis. J. Clin. Microbiol. 1996; 34(4): 918-23. doi: 10.1128/jcm.34.4.918-923.1996. PMID: 8815108; PMCID: PMC228917.
4. Набор для ПЦР GeneProof Mycobacterium tuberculosis. 2026 GeneProof. — Режим доступа: https://www.geneproof.com/geneprooftm-mycobacterium-tuberculosis-pcr-kit/p1077.
5. Статистика туберкулеза в Украине: октябрь 2025 года. — Государственное учреждение «Центр общественного здоровья Министерства здравоохранения Украины». — Режим доступа: https://phc.org.ua/news/statistika-tuberkulozu-v-ukraini-zhovten-2025-roku.
6. Современные методы диагностики ТБ-инфекции и туберкулеза. — Государственное учреждение «Центр общественного здоровья Министерства здравоохранения Украины». — Режим доступа: https://phc.org.ua/news/suchasni-metodi-diagnostiki-tb-infekcii-ta-tuberkulozu.
7. Как диагностируют туберкулез в Украине. — Министерство здравоохранения Украины. Официальный сайт. — Режим доступа: https://moz.gov.ua/uk/jak-diagnostujut-tuberkuloz-v-ukraini.
8. Как не упустить время? Всемирный день борьбы с туберкулезом. — Государственное учреждение «Центр общественного здоровья Министерства здравоохранения Украины». — Режим доступа: https://phc.org.ua/news/yak-ne-vtratiti-chas-vsesvitniy-den-borotbi-z-tuberkulozom.